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鲟鱼人工繁殖技术
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1 范围
本标准规定了鲟鱼人工繁殖的环境条件、亲鱼培育、人工催产、精液采集与保存、鱼卵采集、人工授精、脱粘、孵化、出苗及疾病防治等操作规范。
本标准适用于施氏鲟、西伯利亚鲟、鲟鳇杂交种的苗种人工繁育,其他鲟鱼种类可参照使用,匙吻鲟不适用。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 11607 渔业水质标准
NY 5071 无公害食品 渔用药物使用准则
NY 5072 无公害食品 渔用配合饲料安全限量
SC/T 1086 施氏鲟养殖技术规程
3 环境条件
3.1 场地环境
 亲鱼培育池应为流水、微流水池塘。长方形池塘,面积200 m2~500 m2,池深1.2 m~1.5 m;或圆形池塘,直径7 m~8 m,池深1.2 m~1.5 m,池底中央排水,池塘坡度不大于1:20。
3.2 水质要求
水源充足,每口池塘应设有独立的给排水系统;水质应符合GB 11607的规定,其中养殖水中溶氧大于5 mg/L。
4 亲鱼培育
4.1 亲鱼来源
来自于持有国家发放的良种生产许可证的良种场人工养殖的鲟鱼。不得使用近亲繁殖的后代作亲本。
4.2 亲鱼要求
4.2.1 形态特征、可数与可量性状
亲鱼外部形态特征、可数与可量性状可参考SC/T 1086。
4.2.2 繁殖年龄和体重
允许作为繁殖用亲鱼的最小年龄和最小体重可见表1。
表1 繁殖用亲鱼的最小年龄和最小体重
亲鱼性别 性腺成熟年龄,龄 允许繁殖的最小年龄,龄 允许繁殖的最小体重,kg
雌/♀ ≥7 ≥8 ≥10
雄/♂ ≥4 ≥5 ≥5.5
4.2.3 雌鱼选择
性成熟的个体胸腹部浑圆柔软而有弹性,腹部凹陷钩状,生殖孔红润外突,也可用挖卵器从雌鱼体内取出卵子,目测卵呈灰黑色、椭球形,用卡尺量卵径长轴和短轴均大于2.75 mm,挑选鱼卵极化指数小于1/20的雌鱼用于催产。鱼卵极化指数参见附录A。
4.2.4 雄鱼选择
性成熟的个体胸腹部平整坚硬,在发情期或生殖期生殖孔较紧不外突,两侧轻挤压有乳白色的精液流出;也可穿刺取性腺,目测性腺呈白色或乳白色,显微镜压片检测可见到精子。
4.3 亲鱼放养
4.3.1 专池培育
经选择达到可以进行繁殖的亲鱼,可雄雌单性专池培育,也可以雄雌混养。利用自然或者机械降低亲鱼养殖池水温到10 ℃以下、维持1个月以上,然后每天逐步升温小于3 ℃,将水温提升至15 ℃,亲鱼性腺发育达到Ⅳ期的时候,可进行人工催产。鲟鱼性腺分期方法参见附录B。雄雌亲鱼分开单独放养,等待人工催产。产后亲鱼要单性专池培育。
4.3.2 单性培育
4.3.2.1 放养密度
雌、雄亲鱼应分池,进行单性培育。雌亲鱼放养规格在10 kg~15 kg,亲鱼池放养密度为5 m2~10 m2水面1尾。;雄亲鱼放养规格在5.5 kg~12 kg,亲鱼池放养密度为2.5 m2~5 m2水面1尾。
4.3.2.2 水体交换
产卵季节池水交换不小于1次/6 h,其他季节池水交换不小于1次/24 h。
4.4 亲鱼投喂
4.4.1 饵料
可以使用鲜活饵料或配合饲料,鲜活饵料宜用鱼、虾、螺、蚌等。应切碎、除壳后投喂。饲料应该新鲜,安全质量应符合NY 5072的规定,腐败变质的饲料不应使用。
4.4.2 投喂次数和投饲量
亲鱼入池后,即应投饲。每天早、晚各1次,配合饲料的日投饲量为亲鱼体重的0.5 %~1.0 %。根据摄食情况进行调整。
4.5 日常管理
亲鱼培育期间应加强管理,做好以下工作:
——每天早、晚巡池2次。注意观察亲鱼活动情况,做好饲养记录,发现问题及时解决。
——产卵亲鱼应做标记,建立档案,记录亲鱼的产卵时间和年龄,卵的质量和数量,受精卵孵化率及鱼苗成活率。
——加强鱼病的防治,方法可见附录C。
5 人工催产
5.1 药物种类
人工催产药物可选用促黄体素释放激素类似物(LRH-A)单独使用,或者促黄体素释放激素类似物(LRH-A)和地欧酮(DOM)混合使用。
5.2 注射剂量
雌鱼:每千克鱼体重LRH-A用量为30 μg~100 μg;或每千克鱼体重LRH-A用量为30 μg~100 μg混合DOM 1 mg~2 mg。
雄鱼:每千克鱼体重LRH-A用量为20 μg~50 μg。
5.3 注射次数
雌鱼一般为两次注射,第一次注射10 %的剂量,10 h~12 h后注射90 %的剂量;雄鱼一次注射,在雌鱼第二次注射前2 h~6 h注射。
5.4 注射方法
注射部位有背鳍基部肌肉注射和胸鳍基部注射两种方法,背鳍基部注射采用较多。进针深度1.0 cm~1.5 cm。注射操作完成后拔针头时,应用手指轻轻按住注射处使药物尽量不外流。
6 精液采集与保存
6.1 采集时间
注射催产药物8 h~10 h开始检查雄鱼,轻压雄鱼腹部时发现乳白色精液流出,镜检精子快速运动时间不低于30 s,即可开始采集精液。初次采集后每隔2 h~3 h检查并采集1次,一般可以采集3次~4次。
6.2 采集方法
6.2.1 采集工具消毒
所有使用的采集工具均需消毒。
6.2.2 导管吸出法
将医用导管与医用注射器前端相连,用干燥毛巾将生殖孔周围体表擦干;轻压腹部有少量精液排出时,将导管深入雄鱼生殖孔内,用注射器抽取精液。宜使用内径3 mm、长度5 cm的医用导管和100 mL的医用注射器。
6.3 精液保存
将取出的精液移入干燥烧杯中,封口后放入冰箱0 ℃~4 ℃保存。采出后和使用前的精液均用显微镜进行精子活力检测。
7 鱼卵采集
7.1 鱼卵采集时间
雌鱼催产药物注射4 h后,应每隔1 h检查1次亲鱼,当接近排卵时,应30 min检查1次。当雌鱼出现排卵时,游动活跃,不时撞击水面,卵巢有流动现象,有卵粒涌出,即可采卵。采卵时间掌握在排卵开始的90 min左右,不宜超过150 min,否则影响受精率。
7.2 挤压法
用干燥毛巾擦干生殖孔周围,挤压腹部两侧,将鱼卵挤入干燥容器内。挤压法采卵需间隔1 h~2 h多次采集,直到挤压腹部无鱼卵排出为止。
7.3 微创手术法
7.3.1 手术工具消毒
所有使用工具均应消毒。
7.3.2 手术方法
使用间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐(MS-222)100 mg/L或丁香酚50 mg/L麻醉雌鱼,然后固定在操作台上,用75 %酒精消毒腹部,用手术刀在距生殖孔前方10 cm左右的腹部中线一侧切一个3 cm~5 cm切口,从鱼体腹部两侧由头部向尾部反复挤压,将鱼卵从切口处挤出,直至很少的卵粒从开口处流出为止。然后,在开口处向鱼体内灌入生理盐水,每次加入500 mL~1000 mL,挤压鱼体腹部,排出体内剩余的游离成熟鱼卵,反复2~3次再也挤不出鱼卵后,可结束人工采卵工作。
7.3.3 切口缝合方法
鱼卵全部取出后,用聚丙烯丝线缝合切口,手术切口采用交叉针法、8针4结缝合,并对缝合部位用碘酊和70 %乙醇消毒。整个手术用时需控制在50 min内。术后亲鱼放入暂养池饲养恢复。恢复期间水温13 ℃~17 ℃,溶解氧8 mg/L~10 mg/L。每日现察鱼的活动情况,第3天检查一次切口愈合情况。
7.3.4 手术后雌鱼护理
缝合后给雌亲鱼注射抗生素药物,把受伤雌鱼放入专门护理水泥池中,每日注射抗生素,剂量为每千克亲鱼体重50万单位~80万单位青霉素,持续时间为10 d左右。亲鱼手术后15 d内每天检查亲鱼刀口,检查刀口恢复情况和缝合线是否脱落等。同时投喂适口的人工配合饲料,并注意保障养殖用水的清新。
8 人工授精
8.1 精液密度
根据精液浓度及精子活力确定使用精液体积,精子的质量体积比为1.13 g/mL。
8.2 精液用量
每千克鱼卵使用精液为10 mL~20 mL。
8.3 授精方法
根据鱼卵总量,计算需要的精液量。将精液经镜检后与鱼卵混合,用羽毛搅拌均匀后,按1千克鱼卵加水1千克再搅拌3 min~5 min进行人工授精,避光操作。
9 脱粘
使用医用滑石粉配成20 %~30 %的滑石粉悬浊液,将受精卵倒入含有该溶液的容器内,用手工或脱粘装置宜搅动40 min~60 min,轻轻搅动受精卵直至受精卵分散呈颗粒,静置不结块。每千克受精卵使用10 L~15 L滑石粉悬浊液。为防止缺氧,搅动20 min~30 min后,更换一次滑石粉悬浊液。
10 孵化
10.1 孵化装置
选用麦克唐纳瓶式孵化器,孵化器应架设水槽,使孵出鱼苗直接流入集鱼箱或鱼苗培育池。
10.2 孵化条件
10.2.1 温度
保持水温15 ℃~16 ℃。
10.2.2 溶氧
溶氧不小于6 mg/L。
10.2.3 光照
避免阳光直射。
10.2.4 孵化用水
经过不小于150目的筛绢过滤,避免将敌害生物带入。
10.3 孵化方法
10.3.1 孵化方式
流水孵化。
10.3.2 孵化密度
水的流量3O L/min,可孵化32 kg受精卵,约32×5×104粒。
10.3.3 孵化时间
受精卵孵化6 d±1 d开始出苗;温度越低,孵化时间越长。
10.4 孵化管理
10.4.1 日常管理
 孵化期间应有专人值班,观察检查孵化设备的运转情况,鱼卵的发育状况,及时清除死卵、坏卵,防止水霉生成。检查与清洗滤水设备,保持滤水流畅。做好值班记录。计数出膜的鱼苗,并将其及时移入鱼苗培育池。
10.4.2 水霉控制
孵化期间应及时拣出死卵。水霉病的防治见附录C。
10.4.3 受精率统计
在鱼卵发育到原肠中后期时,开始统计受精率。
11 疾病防治
11.1 防治原则
坚持以预防为主、防治结合、防重于治的原则。
11.2 防治药物的使用
应按NY 5071的规定执行,并按《水产养殖质量安全管理规定》做好有关记录。
11.3 主要疾病的防治
主要疾病的防治可见附录C。
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